1、质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。
2、质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。
3、质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DNA质量，正确保存，确保质粒DNA不被降解。
4、转染试剂选择不当。建议选用效率高，毒性低的转染试剂，比如Entranster试剂。
5、转染体系中含有抑制物。转染体系中不应包含EDTA、柠檬酸、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖。
