出峰时间由多种因素决定：
1、固定相（色谱柱填料，长短，粒径）。
2、流动相（包括有机相水相配比，pH值，有机相组成，水相中缓冲盐组成，缓冲盐浓度，是否加入表面活性剂，是否加入离子对试剂等）。
3、流速（改变全部出峰时间，不会改变出峰顺序和相对保留时间）。
如果液相色谱用的是紫外检测的话就出不了，必须有共轭结构才有紫外吸收。可以考虑用气相色谱或者气质联用。
定义
反相高效液相色谱是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的液相色谱体系（正相色谱）相反。
RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基键合硅胶，典型的流动相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 反相色谱法适于分离非极性、极性或离子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。
以上内容参考：百度百科-反相高效液相色谱
