1、1. PCR 扩增
将 OJP001/002 和靶点正反向引物同时加入反应体系中
Template 0.2 ul
Mix 7ul
OJP001/002 0.6ul
Spacer-F/R 0.4ul
KOD-FX 0.2
ddH2O 1.6ul
PCR 反应程序：
94℃ 2’ →( 98℃ 10’ →’ 55℃ 20’ →’ 68℃ 1’ ) X 45 cycles → 68℃ 5’ →25℃
2、2. LR 反应
PCR 产物（0.4uL） 与 PJE045 做 LR 反应（可以做 1uL 体系） 3h 以上， 电转（热
激转化） 。
3、3. 菌落 PCR
U3-temp: OJP008& OJP026 做菌落 PCR（411 bp） ， 提质粒、 OJP026 测序。
U6a-temp: OJF320& OJP026 做菌落 PCR（800 bp） ， 提质粒、 OJP026 测序。
4、4.引物信息
5、5.质粒图谱
